western blot的原理蛋白印跡的實驗原理是什
編輯： admin 2017-26-03
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與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起...
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類似問題
類似問題1： westernblot的實驗原理(詳細的)[生物科目]
Western Blot與Southern印跡雜交或Northern印跡雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗.
經過PAGE分離的蛋白質樣品(跑PAGE 膠的原理你懂吧~),轉移到固相載體（硝酸纖維素膜NC膜）上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變（這個過程就是轉膜）.
以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分.該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達.
類似問題2： 【做westernblot的一抗孵育的原理是什么啊?如具體的分子機理，不同的蛋白質又如何選擇一抗的？而一抗怎么識別蛋白的？】百度作業幫
只是簡單的抗原抗體反應而已,抗體的氨基酸序列與抗原氨基酸序列相互匹配才能發生反應.所以不同的蛋白質要選擇與其相對應的抗體,是特異性反應.
類似問題3： westernblot的原理及操作步驟、應用有哪些?[生物科目]
原理
Western Blot與Southern印跡雜交或Northern印跡雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗.經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體（例如硝酸纖維素膜NC膜）上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變.以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分.該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達.
分類
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：i.放射自顯影 ii.底物化學發光ECL iii.底物熒光ECF iv.底物DAB呈色 現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色,體同水平和實驗條件的是用第一種方法,目前發表文章通常是用底物化學發光ECL.只要買現成的試劑盒就行,操作也比較簡單,原理如下（二抗用HRP標記）：反應底物為過氧化物+魯米諾,如遇到HRP,即發光,可使膠片曝光,就可洗出條帶.
其他
值得一提的是,western blot 這個名稱的由來很有意思.最開始做印跡工作的是一個叫做Southern的科學家,但印跡的對象是DNA鏈,他把這種技術稱為Southern blot,后來類似的出現了兩個過程相似,但是對象不同的印跡方法,一個針對RNA,一個對蛋白質,人們分別把這兩種技術的稱為Northern和Western,與這兩個技術的發明人沒有關系了.
類似問題4： westernblot最后發光的原理是什么啊?westernblot最后一步曝光原理是什么啊?辣根離子催化什么什么發光的啊?[化學科目]
不是“辣根離子”的反應.而是辣根過氧化物酶在催化過氧化氫的情況下,底物被氧化而產生的發光或顯色反應.化學發光底物現在有很多試劑盒來做,成分有所不同,比如作為底物的有Luminol、Pyridopyridazines等.
類似問題5： 【westernblot放大原理,放大放大.為何會放大.westernblot具有一定的放大功能,即可以將微量的蛋白進行放大,放大倍數可達1000倍,從而看出目的蛋白的存在,在底片上有明顯的顯影.而正常的SDS-PAGE染】百度作業幫[生物科目]
少年,western blot 最后放大的方法有很多很多,從你的敘述上來看,“在底片上有明顯的顯影”,就是底片顯影,那我們就只說說這個哈.
首先,聚丙烯酰胺凝膠上的蛋白會固定到醋酸纖維膜上,然后加上該蛋白的一抗.
如果蛋白表面只有一個一抗結合位點,那么就結合一個一抗,也就沒什么；如果蛋白表面有多個抗體結合位點,不久可以結合多個一抗了么,這也算是放大的一個原因.
然后,在一抗上結合二抗,二抗上用HRP標記,反應底物為過氧化物+魯米諾,可分解底物發光.
這一步是放大中最最關鍵的,一個酶可以在短時間內催化非常多的底物,而沒有酶就不能使底物分解.這就是有和無不同,而酶作用底物的時間越長,分解的底物越多,熒光就越明顯,膠片上的條帶就越深.
底物發熒光以后,用膠片顯影,就可以看到明顯的條帶.
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其實原理很簡單,你要堅持某種蛋白在樣品中是否含有或者大致的量,你就可以先購買或制備該蛋白的抗體,之后通過電泳實驗,將蛋白樣品簡單分離,可以是按分子量分離也可以是按等電點分離,或者進行雙向電泳,一般使用SDS-PAGE.之后進行轉膜,將蛋白從膠上轉移到膜上,以利于抗體雜交,之后加入抗體進行孵育雜交,之后洗掉沒有結合的抗體,就可以進行顯色反應了,顯色反應很多,有化學發光、熒光等等.其實說白了就是讓你能檢測到你加入的抗體都在哪里.之后你就可以確認你的樣品里有沒有該蛋白,相對的量是多少.要是想要確定絕對的量就要使用ELISA 了.