...選用的pGL3-basic，請問是選取pre-
編輯： admin 2017-26-03
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pGL3-basic是檢測啟動子的熒光報告載體,當然是將miR的啟動子序列構建上去.
內切酶按照你基因和多克隆位點的序列來選擇.
類似問題
類似問題1： 綠色熒光蛋白和熒光素酶基因是基因工程中廣泛使用的兩個報告基因,哪個基因表達蛋白的檢測更靈敏?[生物科目]
綠色熒光蛋白GFP自身發光,不需底物.熒光素酶Luciferase需要熒光素底物
當實驗中可以加入足夠的熒光素底物的時候,因為酶的放大效應,熒光素酶更靈敏.
類似問題2： 熒光素酶報告基因與GFP區別?能定量檢測表達蛋白的報告基因有哪些?[生物科目]
只能先就標題的問題談談我的認識.后面的追問我了解得也不全面.
1.兩者的結果檢測方法不同.GFP綠色熒光蛋白,很直觀,能夠直接檢到熒光,在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到,對細胞的生命活動和其他并行的實驗安排影響很小.熒光素酶報告基因使用起來比GFP多一個步驟,因為熒光素酶是個酶,不發熒光,發熒光的是它的底物,熒光素.熒光素在細胞里（要說螢火蟲細胞我就不知道了哦）是沒有的.所以檢測熒光素酶的通常步驟是裂解細胞,釋放熒光素酶,與熒光素及其他所需化學物質混合,才得到熒光.現在雖然也有活細胞內檢測熒光素酶的手段,但要將熒光素送入活細胞,本身就已要對細胞進行相當的干擾.所以一般來說熒光素酶實驗的同一批細胞不適合再做其他并行實驗.
2.兩者的結果含義不同.GFP如果說是定量檢測表達蛋白的話,這個定量只能夠指,表達的細胞是多少個,不表達的細胞是多少個.GFP對于單個細胞來說,就有陽性和陰性兩種結果罷了.GFP不能夠定量地告訴你,這個/群細胞里的表達量是多高還是多低.熒光素酶就能夠定量地得到表達量/表達水平的數值,但這個數值是相對于一群細胞來說,而不是對于單個細胞.所以熒光素酶常常用來研究啟動子的功能與調控,因為啟動子對基因表達的調控可以是漸變的,而不是簡單的開和關兩種狀態.
類似問題3： siRNA轉染肝癌HEPG2細胞,沉默miRNA是什么意思?是為了沉默miRNA的靶基因嗎?需要構建質粒載體嗎?查資料都是說siRNA只降解與其序列互補配對的mRNA.其調控的機制是通過互補配對而沉默相應靶位基因
我覺得你是弄錯東西了吧 siRNA和miRNA是類似的 都是用來沉默靶基因的表達 不同的是miRNA是一個調控多個 而siRNA是一個只調控一個 你可能遇到的實驗是先驗證miRNA通過調控幾個基因達到某種效果 然后單獨轉這幾個基因的siRNA 看是否有這種效果 以確定該miRNA確實是通過這幾個基因達到這種效果 可能說的比較繞了 不懂的再問我吧
類似問題4： 【鯽魚的熒光素酶的大小?還有鯽魚熒光素酶融合載體的構建步驟.】百度作業幫[生物科目]
先說明一點,鯽魚本身沒有熒光素酶,有熒光素酶的鯽魚是轉基因鯽魚,
載體構建步驟：
1.提取熒光素酶基因（利用cDNA文庫里的）
2.尋找質粒（一般用大腸桿菌的）
3.用特定的限制酶切割目的基因,質粒
4.加入DNA連接酶,使二者連接起來
5.對重組質粒進行檢測,合適的（連上了熒光素酶基因的）可以使用
熒光素酶資料：是自然界中能夠產生生物熒光的酶的統稱,其中最有代表性的是一種學名為Photinus pyrali'的螢火蟲體內的熒光素酶.在相應化學反應中,熒光的產生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）.沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,而鈣離子的存在常?？梢赃M一步加速反應（與肌肉收縮的情況相似）.
熒光生成反應：
通常分為以下兩步：
1:螢光素 + ATP → 螢光素化腺苷酸（luciferyl adenylate） + PPi
2:螢光素化腺苷酸 + O2 → 氧熒光素 + AMP + 光
這一反應非常節省能量,幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光.與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉化為光,剩余的能量都變為熱能而被浪費.
熒光素酶分析：
熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對于所有能夠產生熒光的底物和其對應的酶的統稱,雖然它們各不相同.不同的能夠控制發光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發光反應.最為人所知的發光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發光生物如熒光菇（發光類臍菇,Omphalotus oleariu'）或許多海洋生物都不相同.在螢火蟲中,發光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominal trachea）的管道中輸入.一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發出不同顏色的熒光.螢火蟲有2000多種,而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲）則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統學研究很有用.目前研究得最透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲
熒光素酶
熒光素酶可以在實驗室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實驗.熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉染到細胞中.研究者利用基因工程已經使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶.間接體外成像是一種強大的研究手段,可以對整個動物體中的細胞群落進行分析：將不同類型的細胞（骨髓干細胞、T細胞等）標記上（即表達）熒光素酶,就可以用高敏感度的CCD相機進行對動物體內進行活體觀察而不會傷害到動物本身.
在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光,而發出的光子可以被光敏感元件,如熒光探測器或改進后的光學顯微鏡探測到.這就使得對包括感染在內的多種生命活動進程進行觀察成為可能.例如,熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂.法醫可以用含有熒光素酶的溶液來檢測犯罪現場中殘留的血跡.醫院用熒光素酶的發光來發現特定的疾病.熒光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學研究中,例如,用于在轉染過熒光素酶的細胞中檢測特定啟動子的轉錄情況或用于探測細胞內的ATP的水平；這一技術被稱為報告基因檢測法或熒光素酶檢測法（Luciferase Assay）.熒光素酶是一個熱敏感蛋白,因此經常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護能力.
類似問題5： 【為什么熒光分光光度計不能檢測熒光素酶報告基因發出的熒光】百度作業幫
1.濾光片是否選用得當?
2.靈敏度是否調節合適?